Producción biotecnológica
Fermentación:
En un matraz de agitación que contiene medio de precultivo 319 se inocula con esporas de Streptomyces toxytricini 85-13 (o micelio vegetativo), las cuales se incubaron aeróbicamente. Después del pre inóculo se pasa a un fermentador (10l) con el mismo medio de cultivo en agitación constante a 28ºC a 400rpm. Posteriormente el inóculo se pasa a un medio de producción a un fermentador (200l) con medio de producción N7.
Dextrina 4% Harina de soja 3% (NH. sub4)2SO sub 4 0.2% CaCO3 0.6% Aceite de soja 0.8% pH 7
Glucosa 0.5% Ribosa 1% Glicerina 0.5% Peptona 0.2% Harina de soja 2% (NH. sub4)2SO sub 4 0.2% Análisis químico del compuesto:
HPLC |
Proceso:
El caldo de fermentación se centrifuga obteniendo 175l de filtrado de cultivo y 12kg de micelio (se descarta). El filtrado de cultivo es calentado entre 80 y 50ºC en 30l de hexano usando un extractor de funcionamiento continuo. Al obtener la emulsión se mezcla con 50l de hexano/acetato de etilo (1:1), separando la fase orgánica, para posteriormente pasar a secarla con sulfato de sodio y evaporarlo. Se obtienen 199g de extracto crudo. La fase acuosa se diluye con agua a 100l y se extraen con 100l de acetato de etilo. Después de la evaporación de la solución de acetato de etilo se obtienen 49g del extracto crudo. De la fase acuosa se extrae una vez más ahora con 100l de acetato de etilo obteniendose 78g de extracto crudo después de la evaporación. Purificación: Los extractos crudos se filtran utilizando 1kg de gel de silíce 60, eluyendo mediante cloroformo. Posteriormente se purifica mediante una cromatografía de fase inversa en una columna comercial Lobar, utilizando como eluyente el metanol obteniendose 158mg de lipstatina, un aceite amarillento a temperatura ambiente, ceroso y cristalino a bajas temperaturas. |