Producción biotecnológica a partir de cepas de Bifidobacterium
A continuación se muestra el diagrama de proceso para obtener CLA a partir de la conversión que hacen cepas de Bifidobacterium de Ácido linoleico a Ácido Linoleico Conjugado (Oh & Hong et al., 2003)
Análisis Químico
Preparación de la muestra: Aproximadamente 5 g de muestras de aceite de soja en 7 mL viales de vidrio de borosilicato con catalizador de yodo 0,35% se unen a una unidad de foto-irradiación de flujo laminar iluminado con flujo de fotones (energía) ajustado a 3,14 mW durante 12h para producir 15% de aceite de CLA que consta de 11% trans, trans CLA.
Derivatización: con 4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione (PTAD) se añade a 140 mg de CLA FAME en 5 ml de cloruro de metileno y se agita durante 20 min para formar el CLA aducto de Diels-Alder. El exceso de PTAD se elimina mediante la adición de la solución a una columna de gel de sílice y eluyendo CLA-PTAD con 5 ml de hexano: acetato de etilo (05:01).
GC–MS analysis de PTAD para determinar los isomeros presentes, usando una columna de capilaridad GC ZB-5HT INFERNO (30 m 9 0.25 mm i.d, 0.25 mm). La temperatura de inyección debe ser de 250 grados centígrados, se utiliza helio como gas acarreador con un flujo de 2mL/min, el escaneo se lleva a cabo en un rango de iones de 125-500.
Cromatografía de gases
Los FADE, se inyectan 2 micro litros y separados en una columna capilar de cyanopropyl de silica, helio se utiliza como gas acarreador y se utiliza un FID. La temperatura inicial de horno es de 120 °C por un minuto. Después se incrementa 7 grados por minuto hasta llegar a 200 grados, para obtener la concentración se utiliza la fórmula:
CLA (glmg) = (peak area ofCLA)(weight of internaI std)(theoretical correction factor) / (peak area of internaI standard)(sample weight)
Derivatización: con 4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione (PTAD) se añade a 140 mg de CLA FAME en 5 ml de cloruro de metileno y se agita durante 20 min para formar el CLA aducto de Diels-Alder. El exceso de PTAD se elimina mediante la adición de la solución a una columna de gel de sílice y eluyendo CLA-PTAD con 5 ml de hexano: acetato de etilo (05:01).
GC–MS analysis de PTAD para determinar los isomeros presentes, usando una columna de capilaridad GC ZB-5HT INFERNO (30 m 9 0.25 mm i.d, 0.25 mm). La temperatura de inyección debe ser de 250 grados centígrados, se utiliza helio como gas acarreador con un flujo de 2mL/min, el escaneo se lleva a cabo en un rango de iones de 125-500.
Cromatografía de gases
Los FADE, se inyectan 2 micro litros y separados en una columna capilar de cyanopropyl de silica, helio se utiliza como gas acarreador y se utiliza un FID. La temperatura inicial de horno es de 120 °C por un minuto. Después se incrementa 7 grados por minuto hasta llegar a 200 grados, para obtener la concentración se utiliza la fórmula:
CLA (glmg) = (peak area ofCLA)(weight of internaI std)(theoretical correction factor) / (peak area of internaI standard)(sample weight)